Terapia Génica en Cirrosis

Tema: Cirrosis Hepática se revierte por Terapia Génica mediante el Activador del plasminógeno de tipo Uroquinasa

Tipo de Terapia Génica: In vivo (Somática)

Gen o genes a tratar: Gen del Activador de plasminógeno de tipo uroquinasa (uPA)

Vector: Adenoviral que lleva un cDNA modificados que codifican para una forma no secretada del activador del plasminógeno uroquinasa humano (Ad-ΔhuPA)

Órgano a tratar: Hígado

Vías de administración: Inyección en la vena Iliaca
Resultados: 

- Corto: Niveles de uPA Humanos disminuyeron tras día 2 pero muestran claramente niveles detectables durante todo el estudio por encima de los animales de control inyectados con Ad-GFP.

- Mediano: La expresión de uPA humano se detectó en 46 a 80% de los hepatocitos en secciones de hígado de ratas inyectadas inmunoteñidas-Ad-ΔhuPA a partir del día 2 y

- Largo: alcanzo un máximo en el día 6. 

Referencias:

http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download?doi=10.1.1.384.1034&rep=rep1&type=pdf

Terapia con Stem Cell en Cirrosis

Es imprescindible la búsqueda de nuevas alternativas terapéuticas que favorezcan la recuperación de la función hepática, surge la contribución actual de la Medicina Regenerativa que se basa esencialmente en el uso de células madre de diversa fuentes (Médula Ósea, Grasa corporal) y tipo (Mesenquimales, Hematopoyéticas).

Las células escogidas para esta terapia serán células madre mesenquimatosas (MSCs); expresan CD105, CD73, CD44, CD90 Y CD71, pueden ser obtenidas de una variedad de tejidos, entre los cuales tenemos al tejido óseo, tejido adiposo, placenta y a la gelatina de Wharton (cordón umbilical).

Las MSC mantienen y mejoran su función mediante modulación In vivo, éstas actúan en la inhibición directa de la activación de las HSCs (factor importante en la apoptosis celular).
También contribuyen con la cicatrización, ya que son capaces de transformarse a miofibroblastos.

La administración de MSCs son correctamente toleradas y presentan efectos favorables en pacientes con insuficiencia hepática, cirrosis y  de ascitis.  [Revisar atículo Nº1]

Referencias:
http://cmhnaaa.org.pe/ojs/index.php/RCMHNAAA/article/view/321/277
http://www.journal-of-hepatology.eu/article/S0168-8278(13)00062-7/pdf

Transgénico en Cirrosis

Arroz transgénico con albúmina

Científicos han manipulado los granos de arroz, con el objetivo de que éstos produzcan grandes cantidades de albúmina, debido a que la misma es usada con fines terapéuticos, en hemorragias, quemaduras, cirugías, en pacientes desnutridos o deshidratados, con infecciones crónicas y enfermedades renales o hepáticas. Durante la fase de pruebas del experimento, se empleó la albúmina obtenida en el tratamiento en ratas con cirrosis, en menos de 48 horas, empezó a estimular la proliferación de hepatocitos logrando impedir el deterioro del hígado.

Referencias:

https://cienciasycosas.com/2011/11/02/que-avance-supone-la-obtencion-de-albumina-a-partir-de-arroz-transgenico/

http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-75182003000100003&lang=pt

http://www.pnas.org/content/108/47/19078.full

ADN recombinante en la naturaleza y artificial en la Cirrosis

Ejemplos de ADN recombinante en la naturaleza

• Crossing Over.- en la Meiosis cuando las cromátides homólogas de cromosomas paterno y materno se intercambian.
• Episomas.- en bacterias después de una conjugación, ceden un plásmido a una bacteria carente de este.

Ejemplo de ADN recombinante artificial en la Cirrosis

La vacuna elaborada por ADN recombinante Engeriz, Euvax y HBVax2, está indicada para la inmunización causada contra la infección causada por todos los subtipos de VHB en sujetos de todas las edades expuestos a la misma, por lo que se deduce que la Hepatitis B causada por la forma delta de este virus se previene mediante la inmunización con esta vacuna que consiste en una suspensión esteril de antígeno de superficie del virus purificado obtenido de ADN recombinante absorbido en hidróxido de aluminio.

Referencias:

Libro: http://www.worldcat.org/title/biologia-la-vida-en-la-tierra/oclc/503363915/viewport

Artículo: http://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2010/bio101b.pdf

Imagen: http://www.tokyo-med.ac.jp/genet/inv-e.htm

Análisis de PCR en Cirrosis

Tema:
Detección de ARN de virus Hepatitis C en la saliva de un grupo de pacientes con Hepatitis C Crónica. 
Objetivo:
Determinar la presencia de ARN de Virus Hepatitis C, en la saliva de un grupo de pacientes con Hepatitis C Crónica. 
Muestra: Saliva
Ácido Nucléico: ARN viral -- ADNc 
- ARN viral fué extraído de la saliva usando precipitación con cloroformo-isopropanol. 
- cADN fue sintetizado por transcripción reversa en una mezcla que contenía el ácido nucleico.
Secuencia a amplificar: No especifíca.
- Pb: 260 y 300 pares de base
PCR: RT - PCR [ver Gráfico 1]; Nº de ciclos: 35 
-D:90seg/94ºC
-H:40ºC/2min
-E:68ºC/2min
Visualización: EFO en gel de agarosa al 2%. [ver Imágenes 1-A; 1-B; 1-C y 1-D]
Análisis: Se pudo observar una banda de 261 pb, correspondiente al producto de amplificación del control positivo.

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Referencia: 
Artículo: http://www.actaodontologica.com/ediciones/2008/3/arn_hepatitis_c_cronica.asp

Pruebas de Tamizaje y Confirmatoria en Cirrosis

Pruebas de Tamizaje

• Examen físico.- Para encontrar el hígado con anormalidades en la forma o tamaño.
• Conteo sanguíneo completo (CSC).- Para buscar problemas de anemia.
• Pruebas de la función hepática.- Para ver como está funcionando el hígado ( Tiempo de protrombina o Albúmina sérica).
• Ecografía, resonancia magnética o tomografía del abdomen.

La prueba más usada para tamizaje y vigilancia es la ECOGRAFÍA.

Pruebas Confirmatorias

• Endoscopia.- Permite diagnosticar las lesiones de la mucosa.
• Biopsia del hígado.- muestra de higado para analizarla en el laboratorio.

La prueba confirmatoria más usada es la BIOPSIA.

Referencias:

http://medicinadepostgrado.com/infopoems/gastroenterologia/consulta/cirrosis.htm

http://www.salutia.org/
http://www.mayoclinic.org/espanol/enfermedades-y-tratamientos/cirrhosis-del-higado/diagnostico

Alteraciones en la Epigenómica en la cirrosis hepática

Epigenética 

Estudio de cambios heredables en la función de los genes que ocurren sin un cambio en la secuencia de ADN.

1. En el hígado se produce la síntesis y degradación de SAMe, las enzimas responsables del metabolismo de SAMe son la Metionina S-adenosiltransferasa (MAT) y la Glicina N-metiltransferasa (GNMT). Las personas con cirrosis hepática tienen bajos niveles de SAMe debido a una disminución en los niveles de expresión del gen MAT1A que codifica la enzima MAT, alterando el metabolismo de SAMe. También los genes más frecuentemente alterados son TP53 y CTNNB1 que codifica para ß-catenina.
2.Científicos han identificado el primer epi-driver en cáncer de hígado, un tipo de alteración epigenética en el gen IGF2 que hace que los tumores crezcan. La alteración está presente en un 15% de los tumores y en un anticuerpo monoclonal que bloquea de forma efectiva y frena la progresión del tumor .

Referencias:

 http://www.revistaeidon.es/archivo/crisis-y-salud/investigacion-y-ciencia/117910-epigenetica
 http://www.jano.es/noticia-un-tipo-alteracion-epigenetica-que-26740

Alteraciones de la traducción del ADN en la cirrosis hepática

Artículo Científico

En el hígado las células estelares se encuentran en el espacio de Disse y contienen gran cantidad de vitamina A, debido al daño hepático estas células proliferan inducidas  por la secreción autocrina y paracrina de citocinas tales como: el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento transformante β tipo 1 (TGF-β1). s

El hígado cirrótico tiene seis veces mas proteínas en la matriz extracelular que el hígado normal.

Por ende, tenemos acumulación en el daño:

- Temprano de: fibronectina, colágenas tipo III y V.

- Crónico de: colágenas I y IV, undulina, elastina y laminina.

- Progresivo estas proteínas interaccionan con las estructuras vasculares, produciendo una estructura anormal en forma de nódulos (característico de la cirrosis)

Referencias

Artíulo científico: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872007000600015

Alteraciones de la transcripción del ADN en la cirrosis hepática

Artículo Científico

El proteasoma es un complejo proteico grande presente en todas las células eucariotas. Los proteasoma 20S núcleo catalítico se une a diferentes activadores (19S, 11S y PA200), para realizar funciones específicas, tales como la transcripción.

La vía de la ubiquitina-proteasoma es una de las vías vitales en la célula que se vuelve disfuncional como resultado del consumo de alcohol. 

Recientemente, la actividad del proteasoma se ha medido en los núcleos aislados a partir de células del hígado de ratas alimentadas con etanol crónicamente, y el proteasoma se encontró que se inhibió significativamente. 

Por tanto, la inhibición de la actividad del proteasoma en el núcleo está implicado etiológicamente en la acumulación de proteínas dañadas en el núcleo, y en la desregulación de la transcripción.

Video explicativo "Vía ubiquitina-proteasoma"

Referencias:

Texto

 http://medmol.es/temas/66/

http://www.owlmetabolomics.com/enfermedades-hepaticas.aspx

Artículo científico: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2658853/

Imagen: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1729-519X2013000100004

Video: https://www.youtube.com/watch?v=XZdQ0czYLt8#t=46

Alteraciones de la replicación del ADN en la cirrosis hepática

La cirrosis al no ser un síndrome de alteración genético, es decir una mutación, es una enfermedad causada por agente externos como el alcohol.

Sin embargo, existe varios artículos que intentan demostrar que esta relacionada a patologías moleculares, la tenemos relacionada a:

1. Telómeros

La cirrosis hepática se asocia con un deterioro progresivo de la longitud de los telómeros.Los telómeros son estructuras de ADN especializados en los extremos de los cromosomas que consisten en secuencias repetitivas de ADN y nucleoproteínas. 

2. Colagéno tipo 1

En numerosos estudios se indica la existencia de factores genéticos asociados al consumo abusivo del alcohol, específicamente relacionados a los polimorfismos de los genes del colágeno tipo 1, el cual es el colágeno que abunda en ésta enfermedad.El resultado que se obtuvo fue una mayor frecuencia del alelo A2 del sistema polimórfico Rsal/COLIA1. 

En conclusión no se pudo aseverar que éstos polimorfismos se deban exclusivamente al alcohol, pero no se descarta que existan mutaciones asociadas con colágeno tipo 1 por interacción con el etanol.

Referencias:
1. http://themedicalbiochemistrypage.org/es/dna-sp.php#telomerase
2.http://bases.bireme.br/cgi-bin/wxislind.exe/iah/online/?IsisScript=iah/iah.xis&src=google&base=LILACS&lang=p&nextAction=lnk&exprSearch =243160&indexSearch=ID
* Imagen1 tomada de: 

http://danielaazuritadelgado.blogspot.com/2015/04/genes-alterados-en-la-cirrosis.html

Cirrosis

¿Qué es la cirrosis?

Es una enfermedad crónica e irreversible que deteriora al hígado lentamente provocando cambios en su estructura y funciones. 

Además si ésta avanza puede llegar a causar insuficiencia hepática o cáncer de hígado.

Referencias:

- MedlinePlus. EEUU [actualizada en agos 2015; acceso el 8 de oct 2 016]. Disponible en: https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/000255.htm
- Imagen tomada de: http://www.amhigo.com.mx/mi-higado/fases-de-la-cirrosis

Les doy la bienvenida a mi blog, donde trataremos temas con relación a Biología Molecular, ciencia de gran importancia teórica y práctica a nivel médico.

"La satisfacción radica en el esfuerzo, no en el logro. El esfuerzo total es una victoria completa"
Mahatma Gandhi

Referencias:

Imagen1[actualizada 2014; acceso 5 oct 2016] Disponible en: http://biomol1026.blogspot.com/